Мужское бесплодие составляет до 50 процентов случаев отсутствия детей в браке. У бесплодных мужчин в подавляющем большинстве случаев регистрируются аномальные характеристики спермы, такие, как низкая концентрация, плохая подвижность, отклонения в размерах и форме сперматозоидов, высокий уровень повреждения ДНК.
Наличие повреждений ДНК это один из наиболее важных показателей качества спермы - чем больше повреждений, тем меньше шансов получить беременность, больше рисков потерять ее на раннем сроке и выше процент заболеваний у детей, родившихся с применением вспомогательных репродуктивных технологий. Это обосновало важность разработки методов селекции наиболее здоровых сперматозоидов для проведения программ ВРТ. Одним из таких методов является ПИКСИ и его вариации.
В основе метода ПИКСИ возможность взаимодействия сперматозоидов с гиалуроновой кислотой (гиалуронат). Гиалуроновая кислота является важным компонентом многих тканей организма. В половых путях женщины гиалуронат играет ключевую роль при отборе функционально компетентного сперматозоида в процессе оплодотворения.
Рецепторы к гиалуронату обеспечивают взаимодействие сперматозоида и яйцеклетки как при оплодотворении внутри организма, так и в методах ВРТ. Созревание рецепторов к гиалуроновой кислоте на мембранах сперматозоидов связано непосредственно с созреванием самого сперматозоида, что, прежде всего, включает в себя правильное структурное построение ДНК, обеспечивающее надежное сохранение генетического материала. Таким образом, имеется очевидная связь между «чувствительностью» рецепторов к гиалуроновой кислоте и генетической состоятельностью сперматозоида.
Метод ПИКСИ позволяет отобрать те наиболее качественные сперматозоиды, которые прикрепились к «ободку, обогащенному гиалуроновой кислотой» и использовать их для процесса оплодотворения, что существенно увеличивает шансы наступления беременности, увеличивает количество оплодотворенных яйцеклеток и эмбрионов высокого качества.
Используется один из методов отбора: или чашка ПИКСИ, или среда SpermSlow.
Подготовка спермы к проведению методики ПИКСИ основана на отделение прогрессивно-подвижной фракции спермотозоидов от неподвижных спермотозоидов и спермоплазмы.
Для выделения сперматозоидов из нативного эякулята существует несколько методов: метод всплытия «swim-up» и метод центрифугирования эякулята в градиенте плотности.
Метод всплытия «swim-up» или флотация довольно часто используемый метод миграции сперматозоидов. Подход имитирует естественное перемещение сперматозоидов через цервикальную слизь. При этом фракция спермы располагается под фракцией культуральной среды, что позволяет прогрессивно подвижным сперматозоидам переместиться во фракцию среды.
Метод центрифугирования эякулята в градиенте плотности основан на принципе центрифугирования спермы через градиент, образованный, двумя слоями растворов с возрастающей плотностью. Таким образом, подход основан на разделении компонентов (клеток) эякулята по их удельному весу и плотности.
Важным условием при выборе того или иного метода является сохранение жизнеспособности и подвижности мужских половых клеток после их выделения и получение фракции прогрессивно подвижных форм сперматозоидов с нормальной структурой хроматина. Ключевым моментом при выделении сперматозоидов является то, что сперма должна быть подготовлена в течение одного часа после получения.
Полученная таким образом фракция сперматозоидов используется в программах ЭКО, ЭКО+ИКСИ, ИКСИ с применением ПИКСИ.
Показания для ПИКСИ:
• показатели спермограммы ниже нормы (олигозооспермия, астенозооспермия, тератозооспермия);
• неудачные программы ИКСИ в прошлом;
• неоднократные самопроизвольные прерывания беременности на ранних сроках.
ПИКСИ 1 КАТЕГОРИИ
ПИКСИ 1-ой категории - это дополнительный метод при проведении ИКСИ, попытка приблизить отбор сперматозоида вне организма к физиологической селекции.
В основе метода ПИКСИ возможность взаимодействия сперматозоидов с гиалуроновой кислотой (гиалуронат). Гиалуроновая кислота является важным компонентом многих тканей организма. В половых путях женщины гиалуронат играет ключевую роль при отборе функционально компетентного сперматозоида в процессе оплодотворения.
Рецепторы к гиалуронату обеспечивают взаимодействие сперматозоида и яйцеклетки как при оплодотворении внутри организма, так и в методах ВРТ. Созревание рецепторов к гиалуроновой кислоте на мембранах сперматозоидов связано непосредственно с созреванием самого сперматозоида, что, прежде всего, включает в себя правильное структурное построение ДНК, обеспечивающее надежное сохранение генетического материала. Таким образом, имеется очевидная связь между «чувствительностью» рецепторов к гиалуроновой кислоте и генетической состоятельностью сперматозоида.
ПИКСИ существенно увеличивает шансы наступления беременности, увеличивает количество оплодотворенных яйцеклеток и эмбрионов высокого качества.
Используется один из методов отбора: или чашка ПИКСИ, или среда SpermSlow.
Показания для ПИКСИ (1-категории):
• показатели спермограммы ниже нормы (олигозооспермия, астенозооспермия, тератозооспермия);
• неудачные программы ИКСИ в прошлом;
• неоднократные самопроизвольные прерывания беременности на ранних сроках.
ПИКСИ 2 КАТЕГОРИИ
В основе метода ПИКСИ 2-ой категории лежит также принцип работы с гиалуроновой кислотой, но при этом уже используются предварительная обработка спермы и впоследствии работа на чашках ПИКСИ и среде SpermSlow.
Предварительная обработка спермы включает в себя отбор методом градиента концентраций на средах SilSelect (Бельгия) или SupraSperm (Дания). После центрифугирования в этих средах на дне пробирки остается фракция, в которой находятся функционально нормальные сперматозоиды. Неподвижные и аномальные сперматозоиды, лейкоциты и другие клетки спермы сосредотачиваются выше, в слоях среды.
Метод позволяет не только увеличить количество подвижных сперматозоидов и сперматозоидов нормальной формы, но также устранить бактерии из спермы и снизить содержание свободных радикалов кислорода - продукта перекисного окисления липидов.
Такие сперматозоиды отбираются и используются для работы на чашках ПИКСИ и среде SpermSlow.
ПИКСИ 3 КАТЕГОРИИ
ПИКСИ 3-ей категории включает в себя работу с градиентом концентраций, как при ПИКСИ 2-ой категории, а также очистку от апоптотических, фрагментированных сперматозоидов и последующую работу гиалуроновой кислотой (чашки ПИКСИ, SpermSlow).
Все сперматозоиды имеют ограниченный срок жизни и заканчивается этот процесс апоптозом (гибелью клеток). В сперме, где начался процесс апоптоза, высокая вероятность фрагментации (разрывов) ДНК. При этом эти сперматозоиды имеют нормальную морфологию и подвижность. Но если апоптотические сперматозоиды используются для оплодотворения яйцеклетки, в последующем развитие эмбриона будет нарушено, вплоть до остановки его развития. В отличие от этого, сперматозоиды, отобранные с помощью этой методики, отличаются более высокой морфологией, подвижностью, высоким митохондриальным потенциалом.
Использование неапоптотической популяции сперматозоидов с неповрежденными мембранами и не фрагментированной ДНК могут оптимизировать результаты ВРТ и стать эффективной процедурой в тех случаях, когда в ранее проведенных программах ЭКО/ИКСИ регистрировались:
1) нарушения процессов оплодотворения;
2) низкое качество эмбрионов;
3) остановка развития эмбрионов;
4) отсутствие беременности после неоднократных программ ВРТ.
Заключение, о целесообразности использования ПИКСИ 1,2,3 категории, дает эмбриолог, решение принимают пациенты.
